細(xì)胞刮刀的實(shí)驗(yàn)步驟你要了解嗎

 

　　細(xì)胞刮刀的刀片是由高分子材料TPE制成，長柄是由高分子材料ABS制成，主要是適用于收獲細(xì)胞，其優(yōu)化設(shè)計(jì)，確保對(duì)細(xì)胞損傷，并盡可能接觸細(xì)胞生長的所有器皿表面。用于人工收獲細(xì)胞，優(yōu)化設(shè)計(jì)確保對(duì)細(xì)胞較小的傷害并盡可能接觸細(xì)胞生長的所有表面。細(xì)胞刮刀常用于從培養(yǎng)皿中收獲細(xì)胞（尤其是干細(xì)胞）。

 

　　細(xì)胞刮刀實(shí)驗(yàn)步驟：無菌條件下取新生小牛大腦皮層灰質(zhì)部，4℃D-Hank′s液洗滌4次，至無血跡殘留。剪成1mm3左右的組織碎塊并置于玻璃勻漿器內(nèi)，加入兩倍體積的MEM培養(yǎng)基，勻漿上下20次？勻漿液先用100目（直徑149μm）尼龍網(wǎng)布式漏斗抽濾，培養(yǎng)基洗滌4次，收集濾液。然后用200目（直徑74μm）尼龍網(wǎng)布式漏斗抽濾，MEM培養(yǎng)基洗滌4次。細(xì)胞刮刀收集200目尼龍網(wǎng)上的組織（即牛腦微血管），將其置于離心管中，1500r/min離心洗滌10min。離心洗滌的腦微血管懸浮于的0.1%膠原酶中，旋渦振蕩15sec以充分混勻，置于37℃恒溫振蕩水浴箱中振蕩消化50min，取出后旋渦振蕩15sec，1500r/min離心10min，棄上清，用20%BCS的培養(yǎng)基懸浮，接種于明膠鋪被的培養(yǎng)瓶中（培養(yǎng)瓶中加入1%明膠-D-Hank′s液洗滌3ml，37℃孵箱中放置24h，用前倒掉明膠溶液即得明膠覆蓋的培養(yǎng)瓶），置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中，37℃、5%CO2、飽和濕度條件下培養(yǎng)。靜置5～7天后，可見少量細(xì)胞生長，20%BCS的MEM培養(yǎng)液換液，以后每2～3天換液一次，至細(xì)胞長成致密單層后可傳代培養(yǎng)。